从5月份细胞污染到现在一个半月了，一直在跟细胞污染做斗争，一直在复苏抢救细胞，一直在白白养着细胞，一直在忐忑不安担心焦虑中度过。浪费了大把的时间和材料，屡屡失败原因何在，该深深反思总结了。

不能用不变应万变的培养方法工作，当培养几次失败后，就应及时总结和分析出问题关键并加以改进，培养细胞才易成功。

简单回顾一下我的细胞之旅。

去年11月18日细胞从广东快递邮来，开始了我的养细胞旅程。起初，在看了别人操作几次后，亲自上阵“摆弄”细胞。直到今年5月，细胞状态一直较好。细胞污染对于我是遥远的，心里默想养细胞也不难啊。可是，直到5月2号，在镜下发现培养瓶内有很多悬浮的细沙粒状物，心一紧，忐忑起来。换液，再观察。第二天带着期望和担忧看细胞。沙粒增多，与福荣商量后，证实污染，查资料得：黑胶虫污染。

晕~~~~该经历的必须要经历。养细胞不污染，怎能算得上完整呢？自嘲自我安慰。

重新高压所有耗材，重配培养基，并对先前用过的培养基做无菌试验。复苏新的细胞。

5月5日超净工作台操作界面坏了，搬到306继续做。时隔半个月，23日超净工作台修好。搬回令人怀念的我们的地盘。

期间，细胞出现几次相似的污染，弃去细胞，重新复苏。

问题出现了，复苏的细胞不贴壁，复苏一次次失败，又一次次重新复苏。有几次长好了，可是在传代后又被污染。

无奈，找卫老师帮忙重寄细胞。卫老师复苏传代两次后，给我寄来。6月7日收到，8日传代，不贴壁~细胞悬浮。远程抢救宣告失败。

复苏5月份冻存的一只细胞，养了一周，传{dy}代长势很好，第二次传代后，细胞悬浮不贴壁。

同样的现象出现3次：都是在复苏第二次传代时细胞不贴壁。

综上，细胞遇到的两大问题：污染（养细胞大忌和关键）和不贴壁。前者大多数人都遇到过，后者比较罕见，原因让人琢磨不透。

出现问题，解决问题。细胞一旦污染，换液多加xxx等其实没用。{wy}的处理是弃去细胞，重新复苏细胞培养，消毒灭菌细胞培养环境。具体方法：

1、弃去已污染的细胞，复苏冻存细胞；

2、培养室彻底消毒灭菌：用甲醛和高锰酸钾熏蒸；

3、培养箱内用75%的酒精和新洁尔灭擦洗。

4、紫外线空气xx。

5、重新高压所有耗材：吸管、离心管、培养瓶、枪头等

6、PBS重配重新高压，培养基换新。退去天津产胎牛血清用四季清血清，买现成Hyclone培养基。

按照以上方法操作后，仍出现过2次污染，追究原因，可能为离心机离心过血液，培养室频繁进出人，造成xx孳生。

以上都是客观原因，操作不慎不严格遵守无菌操作可能是主要原因。

分析个人原因：

1、马虎大意，抱有“差不多”想法，懒，吸管重复用次数多

2、各试剂的盖子不匹配，容易长菌。

3、操作时严格无菌操作，没坚持做到戴口罩，操作不小心，枪吹打时部分悬液泡沫进入枪内，培养基不用时应立马盖上盖子。

4、细胞冻存方法：冻存管应煮洗后烘干再高压，冻存液应现用现配，而我上学期冻得细胞大都是一次多配一些留待下次用，影响了冻存液的质量。这学期没有想到冻存细胞，之前冻存的因为时间久了细胞死了或状态不好，是不贴壁的原因之一。

5、细胞3次都在复苏细胞后第二代传代后不贴壁原因：冻存时间长了，细胞状态欠佳，细胞消化时间长了细胞过渡消化。做台盘蓝实验发现，这些悬浮的细胞成活率约91%。细胞活着为什么不贴壁？培养瓶原因，但同学用的是同批次培养瓶未出现问题，培养箱各项指标值正常。有些过度消化。

除了客观原因，如天气变暖xx易生长外，主要应归咎于个人原因。以后要从这些方面改正，做到以下方面：

1、各种塑料管使用之前煮沸15min后烘干再高压：包括离心管、各种盖子、EP管和冻存管。

2、染毒时，用5ml离心管将毒物和培养基混匀后再加入板内。避免误差。

3、严格无菌操作：戴口罩手套，放培养瓶至箱内前培养哈。

4、改变观念，改掉“凑活”心理，尽量精益求精，操作前先计划周全所有条件准备好，考虑到所有可能出现的问题和应对方法后再做，不能盲目瞎搞。

5、不要怕麻烦，勤快些。严格按照要求去做。

6、心态要平和，要增强心理承受能力，承受得起失败的打击。不能先击败自己，振作，屡败屡战！！！别太放在心上影响生活

“你骗他，他骗你！”实验需要认真对待，养细胞就和为人处世一样的道理。

 “只有功劳没有苦劳！”看着{yt}貌似忙，但是没有结果，一切都是空的，一学期就这样浪费了，得到的是满当当的失败经验，不再总结，不再吃一堑长一智，就难毕业了！！！暑假赔上，用心呵护细胞。