一、实验材料

　　普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同xx的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。

　　药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）

　　xx：待做药敏试验的xx

　　仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头

二、实验准备

　　2.1　药敏片的准备：购买或自制

　　2.1.1　制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压xx后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使xx干燥。

　　2.1.2　xx药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录xx名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。

　　2.2　药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用xx量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量xx量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。此稀释液即为用于做药敏试验的药液。

三、实验操作方法

　　3.1　药敏片法

　　3.1.1　在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰xx的接种环挑取适量xx培养物，以划线方式将xx涂布到平皿培养基上。具体方式；用xx接种环取适量xx分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至xx均匀密布于平皿。（另：可挑取待试xx于少量生理盐水中制成xx混悬液，用xx棉拭子将待检xx混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密）

　　3.1.2　将镊子于酒精灯火焰xx后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。

　　3.1.3　将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

　　3.2　牛津杯法
　　3.2.1　在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰xx的接种环挑取适量xx培养物，以划线方式将xx涂布到平皿培养基上。具体方式；用xx接种环取适量xx分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至xx均匀密布于平皿。（另：可挑取待试xx于少量生理盐水中制成xx混悬液，用xx棉拭子将待检xx混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密。）

　　3.2.2　以无菌操作将xx的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、高10nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，并在小管处标记各种xx名称。每个平板可放4-6支小管。待分钟后，分别向各小管中滴加一定数量的各种药液，勿使其外溢。置37℃培养8-18小时，观察结果。

　　3.2.3　将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

　　3.3　打孔法：

　　该法较简单，成本低，易操作，比较适用于商品xx的检测。

　　3.3.1　在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰xx的接种环挑取适量xx培养物，以划线方式将xx涂布到平皿培养基上。具体方式；用xx接种环取适量xx分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至xx均匀密布于平皿。（另：可挑取待试xx于少量生理盐水中制成xx混悬液，用xx棉拭子将待检xx混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密。）

　　3.3.2　以无菌操作将xx的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。

　　3.3.3　加样：按不同药液加样，样品加至满而不溢为止。

　　3.3.4　将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

　　在涂有xx的琼脂平板上，xxxx在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的xx生长受到抑制。过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与xx浓度、划线xx浓度有直接关系。

　　一、药敏实验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。

　　表1　xx敏感实验判定标准

　　二、xx敏感实验判定标准参考表1，多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上为高敏，6—9毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。

　　一、培养基：应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时，厚度合适（约5-6mm），不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有xxxx的拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的xx活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺药和TMP的活性。

　　二、xx接种量：xx接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏xx的xx活性。

　　三、xx浓度：xx的浓度和总量直接影响的结果，需xx配制。商品药应严格按照其推荐xx量配制。

　　四、培养时间：一般培养温度和时间为37℃ 8-18小时，有些xx药扩散慢如多粘菌素，可将已放好xx药的平板培养基，先置4℃冰箱内2~4小时，使xx药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推迟xx的生长，而得到较大的抑菌圈。

　　xx敏感实验后，应选择高敏xx进行xx，也可选用两种xx协助使用，以减少耐药菌株。在选择高敏xx时应考虑xx的吸收途径，因为我们药敏实验是药液直接和xx接触，而在给禽用药的时候，必须通过机体的吸收才能使xx达到一定的效果，所以在给禽用药时，高敏xx一定要配合适宜的给xx法，这样才会达到好的xx效果。文章来自：网络转载！

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