岛津LC-10AT型HPLC操作规程
岛津LC-10AT型HPLC操作规程
2010-05-31 16:17:54
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1.目的
规范岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。
2.范围
3.职责
质检员对本规程的实施负责。
4.规程
4.1 系统组成:本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵(分主/A泵和副/B泵)、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成,另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。
4.2 准备
4.2.1 准备所需的流动相,用合适的0.45μm滤膜过滤,超声脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱(注意方向)和定量环。
4.2.3 配制样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制),用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.3 开机:接通电源,依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器,待泵和检测器自检结束后,打开打印机、电脑显示器、主机,{zh1}打开
4.4 参数设定
4.4.1 波长设定:在检测器显示初始屏幕时,按[func]键,用数字键输入所需波长值,按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。
4.4.2 流速设定:在A泵显示初始屏幕时,按[func]键,用数字键输入所需的流速(柱在线时流速一般不超过1ml/min),按[Enter]键确认。按[CE]键退出。
4.4.3 流动相比例设定:在A泵显示初始屏幕时,按[conc]键,用数字键输入流动相B的浓度百分数,按[Enter]键确认。按[CE]键退出。
4.4.4 梯度设定
4.4.4.1 在A泵显示初始屏幕时,按[edit]键,[Enter]键;
4.4.4.2 用数字键输入时间,按[Enter]键,重复按[func]键选择所需功能(FLOW设定流速,BCNC设定流动相B的浓度),按[Enter]键,用数字键输入设定值,按[Enter]键;
4.4.4.3 重复上一步设定其它时间步骤;
4.5.1 将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中;
4.5.2 逆时针转动A/B泵的排液阀180°,打开排液阀;
4.5.3 按A/B泵的[purge]键,pump指示灯亮,泵大约以9.9ml/min的流速冲洗,3min(可设定)后自动停止;
4.5.4 将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。
4.5.5 如管路中仍有气泡,则重复以上操作直至气泡排尽。
4.5.6 如按以上方法不能排尽气泡,从柱入口处拆下连接管,放入废液瓶中,设流速为5ml/min,按[pump]键,冲洗3min后再按[pump]键停泵,重新接上柱并将流速重设为规定值。
4.6 平衡系统
4.6.1 按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件,输入实验信息并设定各项方法参数后,按下“数据收集”页的 [查看基线] 按钮。
4.6.2 等度洗脱方式
4.6.2.1 按A泵的[pump]键,A、B泵将同时启动,pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统,一般最少需6倍柱体积的流动相。
4.6.2.2 检查各管路连接处是否漏液,如漏液应予以排除。
4.6.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值,压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡,按4.5.6操作。
4.6.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min,噪声为<0.001mV时,可认为系统已达到平衡状态,可以进样。
4.6.3 梯度洗脱方式
4.6.3.1 以检验方法规定的梯度初始条件,按4.6.2项下方法平衡系统。
4.6.3.2 在进样前运行1~2次空白梯度。方法:按A泵的[run]键,prog.run指示灯亮,梯度程序运行;程序停止时,prog.run指示灯灭。
4.7 进样
4.7.1 进样前按检测器[zero]键调零,按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点,再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。
4.7.2 用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量。
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