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详细说明:3.高通量蛋白质组和靶向蛋白质组学分别有各自不同的技术体系,以下对其主要的技术方法和特点做一个简要介绍:1.高通量蛋白质组,主要使DDA(DataDependentAcquisition)技术体系。DDA是基于鸟法(shotgun)的原理,因为生物样品中蛋白质复杂程度极高,仪器不可能做到全部号的采集,因此只能在每一个检测循环中优先采集相对较强的号。这种方法有两个局限性:{dy},对于低强度的号无法有效采集,限制了检测的灵敏度;第二,检测中“较高的号”是一个相对的概念,不同样品甚至不同批次的上机不可避免地产生一定的随机性。2.靶向蛋白质组学技术,顾名思义是只选取和检测目标蛋白相关的号,忽略其他无关的号,因此可以实现对目标蛋白定量的高特异性和高准确性。如果我们将常用的高通量蛋白质组技术方法理解为霰1弹,那么靶向蛋白质组学技术就是狙击。靶向蛋白质组学技术主要包括SRM/MRM和PRM两种方法。SRM/MRM(Selected/Multiplereactionmonitoring)使用的是三重四级杆的质谱,利用四级杆高选择性的特点对母离子和子离子依次进行分选,该技术在2012年NatureMethods中有详细的总结论述1,并被评为年度技术(MethodoftheYear2012),可见其重要意义和应用价值。在SRM/MRM的基础上,2012年晚些时候,在MCP上报道了型的靶向蛋白组技术——PRM(Parallelreactionmonitoring)技术2,该技术结合了四级杆的高选择性以及Orbitrap的高分辨、高精度特性,能够对二级图谱进行立的鉴定,方法流程更加便捷。与传统的SRM/MRM相比,PRM在复杂背景下具有更{yx}的抗干扰能力和检测灵敏度。因此,PRM是更具优势和潜力的型靶向蛋白质组学检测方法,堪称SRM/MRM的升级版。
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