1.概述
本检测采用酶联免疫法定量检测麻痹性贝类毒素的存在。神经性贝毒是一种毒素,石房蛤毒素是麻痹性贝类毒素的一种。本检测可用于水产样本对贝类毒素的定性和定量检测,例如甲壳类动物的样本。对于甲壳类动物的需要提前制备样本。如果条件允许,阳性样本可以做HPLC,GC/MS或其他方法确认。
2.安全性说明
标准品溶液含有少量的石房蛤毒素。底物溶液含有四甲基联苯胺,终止液还有稀硫酸。避免皮肤与粘膜与终止液接触。若终止液与皮肤接触,可用水洗去。
3.贮藏与稳定性
试剂盒贮存在4-8°C。使用前试剂盒中溶液要恢复到室温(20—25度)。在保质期内试剂盒都可以正常使用。
4.检测原理
本实验采用直接竞争ELISA方法,用特异性抗体识别石房蛤毒素。样本中的石房蛤毒素可与石房蛤毒素-酶结合物竞争,同包被在微孔板上的兔抗-石房蛤毒素抗体结合。石房蛤毒素抗体与包被在微孔底部的二抗结合。洗板后加入底物溶液,显蓝色。蓝色的深度与石房蛤毒素在样本中的浓度成反比。颜色反应在规定时间内终止,颜色用酶标仪读值。每孔的样本浓度值可以通过标准曲线来读取。
A.试剂盒组成
1.真空包装微孔板(12×8条),包被一种羊抗兔二抗
2.标准液(6):0, 0.02, 0.05, 0.1,0.2和0.4 ng/mL (ppb)
3.1瓶6mL抗体(兔抗石房蛤毒素抗体)
4.1瓶6mL石房蛤毒素-HRP酶标记物
5.2瓶25ml样品稀释缓冲液(10倍浓缩)(即用即配,例如:10ml浓缩缓冲液+90ml蒸馏水)
6.1瓶100ml洗板缓冲液(5倍浓缩) (即用即配,例如:10ml浓缩缓冲液+40ml蒸馏水)
7.1瓶12 mL底物(显色液TMB)
8.1瓶12mL终止液
C.操作步骤
1、在对应的微孔中加入50μL的标准和样品(推荐做2-3个重复)
2、每个测试孔都加入50 μL石房蛤毒